Медицинская клиника «Мед Тайшет» » Статьи » Гастроэнтерология » Методы определения вирусной нагрузки при гепатите С

Методы определения вирусной нагрузки при гепатите С

Вирусная нагрузка при гепатите С – определение присутствия РНК гепатотропного вируса в крови человека с помощью нескольких лабораторных методов. Применение каждого из них оправдано в определенных случаях, хотя точность проведенного исследования варьируется в каждом случае, а чувствительность может отличаться в сотни раз.

Способность метода обнаружить определенное количество вирусных РНК измеряется в МЕ (международных единицах, определяемых как 2,5 вирусных копии) на 1 мл биологического материала. Иногда как количественный показатель используют количество генотипов на единицу гуморальной жидкости.

Характер проблемы и пути распространения

Вирусный гепатит С – один из самых опасных видов гепатотропных вирусов семейства флавивирусов. В отличие от других болезней, поражающих печень человека, он состоит из одной цепочки РНК, покрытой капсидами (специфическими белковыми молекулами) и жирами и обладает способностью мутировать:

  1. Даже когда заражение происходит через один из описанных вариантов (а генотипов описано уже 11), видоизменения присутствующего в организме патогенного агента может достигать 40 разновидностей.
  2. Опасность антропонозного заболевания состоит именно в этой способности РНК-вируса, потому что с ним не в состоянии справиться иммунитет человека.
  3. Пока вырабатываются антитела к одной разновидности, она успевает мутировать и снова осуществляет свою деструктивную деятельность, не встречая видимых препятствий.
  4. Изначально патогенный агент попадает в кровяное русло, потому что основным способом заражения считается гемотрансмиссивный. Это характерно для семейства, к которому принадлежит гепатотропный вирус, потому что почти все остальные представители рода передаются через укусы насекомых – вирусы желтой лихорадки, клещевого энцефалита, Западного Нила и Зика.
  5. В случае с гепатитом С, РНК патогенного агента могут обнаруживаться в любой биологической жидкости человека, вплоть до скапливающейся в брюшной полости при асците. Однако превалирующим способом инфицирования считается именно трансмиссионный – когда передача происходит через кровь. Это наиболее вероятный путь проникновения в организм РНК, которые затем оказываются в гепатоцитах и продуцируют свои копии.
Методы определения вирусной нагрузки при гепатите С

Вероятных путей заражения гепатитом С множество. Существуют группы риска, где такой опасности можно подвергаться ежедневно – социально неблагополучные слои населения (наркоманы, алкоголики, сторонники свободного и незащищённого секса), медработники, имеющие дело с донорской кровью и врачи Скорой помощи, работники станций переливания крови.

Для простого человека тоже существует риск заражения через нестерильный медицинский или косметологический инструментарий, незащищенный половой контакт с инфицированным партнером, трансплантацию органов или переливание биоматериалов при болезни, у стоматолога или на иглоукалывании.

Методы лабораторной диагностики

Основная цель определения вирусной нагрузки при гепатите – выявить присутствие патогенного агента и степень его присутствия. Для этого разработано несколько диагностических методик, проводимых для обнаружения РНК антропонозного вируса. В случае с флавовирусом огромное значение имеет ранняя диагностика заболевания, при которой велика вероятность полного излечения.

Вирусная нагрузка при гепатите С дает информацию о степени и стадии развития поражающего печень фактора, его размножении, поэтому используется не только в предварительной диагностике, но и для контроля за лечением заболевания.

Она помогает в выборе правильной терапевтической тактики, дает весомые основания для составления прогноза течения болезни.

Наличие нескольких методов диагностики вирусной нагрузки при гепатите вполне объяснимо, если учесть, что определение показателя происходит на разных этапах болезни и преследует вариабельные цели:

  • активность вируса определяют до лечения, после подтверждения факта присутствия в организме антропонозной гепатотропной инфекции;
  • в период проведения лечебных мер можно определить степень эффективности проводимой терапии, эффективность назначенных гепатологом лекарственных средств, скорректировать дозировку или провести замену медикаментов, не давших ожидаемого результата;
  • проведение тестов после предполагаемого выздоровления тоже востребовано – оно позволяет выявить хроническую форму поражения или вторичного рецидива при заболевании мутировавшей формой, против которой у организма нет иммунитета.
Вирусная нагрузка при гепатите С – концентрация вирусных РНК в крови.

Качественное тестирование дает намного меньше информации, потому что только подтверждает присутствие или отсутствие вируса гепатита С в крови. Дешевые тесты определяют только значительное количество РНК, поэтому у них небольшая диагностическая ценность. Ведь обнаружить массивные скопления геномов можно только на запущенной стадии болезни, а она уже сопровождается характерной клинической картиной. Единственная норма, когда определяется вирусная нагрузка при гепатите С – это полное отсутствие в крови его РНК.

При проведении нужно ориентироваться на чувствительность тест-системы. Если использовать в качестве критерия метод разветвленной ДНК, то она может улавливать только 1250 копий, присутствующих в 1 мл крови, зато это дешевый метод, получивший широкое распространение. ПЦР способна увидеть всего 125 копий (или 50 МЕ против 500 МЕ в предыдущем случае), несмотря на то, то вирусная нагрузка при гепатите С – только один, второстепенный показатель, выявляемый Полимеразной цепной реакцией.

Поэтому полагаться на отсутствие генома при использовании качественного метода нельзя. Существует высокая вероятность, что он был пропущен из-за низкой чувствительности теста.

Определение количественных показателей

Существует несколько методов, позволяющих диагностировать присутствие вируса гепатита С, но во многих случаях их использование дает только часть необходимой информации. Ранее гепатологу требовалось несколько анализов:

  • серологический определял уровень антител к патогенному агенту, но это только возможность подтвердить их наличие, а не выявить причину появления;
  • тест на иммуноглобулины информативен только после определенного времени, необходимого для выработки антител, а за это время болезнь может быстро развиться;
  • при всей рекламируемой достоверности экспресс-анализа, его нельзя считать единственным основанием для врачебных выводов;
  • эластометрия, биопсия и УЗИ – могут назначаться после того, как есть основательные подтверждения присутствия вирусов.
как проходит диагностика

На сегодняшний день вирусная нагрузка при гепатите С определяется с помощью трех методов исследования, из которых самый чувствительный – это ТМА – транскрипционная амплификация. Это новое слово в лабораторной диагностике, который, по мнению специалистов, может стать золотым стандартом при определении присутствия вируса гепатита М, и не только его. Чувствительность метода позволяет определить РНК даже в количестве 10 МЕ или 25 копий в 1 мл крови.

Однако найти его можно только в современных крупных медицинских центрах, а вот метод разветвленной ДНК и полимеразной цепной реакции гораздо доступнее. Но ПЦР позволяет определить наличие генома в 10 раз эффективнее и при этом дает не только информацию о такой нагрузке, но и другие ценные данные.

ПЦР на гепатит

Несомненное преимущество этого метода, проводимого на молекулярном уровне, обнаруживается не только при диагностике гепатита С. Кроме вирусной нагрузки, он определяет агрессивность присутствующего в организме генотипа. После открытия возможности использования метода молекулярной биологии в медицине, ПЦР получил широкое распространение, как способ:

  • диагностировать заболевание на той стадии, когда другими известными исследованиями биоматериала это сделать невозможно;
  • определить самоизлечение, которое другие реакции расценивают, как присутствие болезни, из-за циркуляции в кровяном русле антител, выработанных иммунной системой;
  • выяснить уровень вирусной нагрузки и агрессивность присутствующих геномов;
  • дать цифровые показатели билирубина, щелочной фосфатазы, печеночных ферментов и многих других важных компонентов, которые наглядно свидетельствуют о поражении печени (и это крайне важно, пока организм человека не выработал антитела);
  • различить существующие генотипы, чтобы определить терапевтическую тактику;
  • осуществлять контроль за лечением и передачей вируса от матери ребенку.
вирусная нагрузка при гепатите с
Амплификатор – специальный прибор для проведения реакции, с помощью специальных добавок (ДНК и полимераз) присоединяет к участку, выбранному для копирования комплементарные праймеры. Они могут обнаружить даже фрагмент вируса с помощью заданной программы, и это гарантирует точность определения показателя.

Возможные результаты и их толкование

Ориентироваться только по уровню вирусной нагрузки при гепатите С весьма непросто. Есть три варианта: низкий, высокий или не определился. Но в гепатологии нормой признан только вариант с отсутствием, да и то, если было проведено повторное исследование, чтобы исключить ложноотрицательный результат или погрешности лаборатории. Ведь в каждой из них работают люди, которые могут ошибаться, иногда бывает некачественный биоматериал или реактивы.

Все это можно скорректировать, проведя повторный анализ или воспользовавшись услугами другого диагностического центра. Ни один клиницист не ограничится только одним исследованием, сделанным однократно.

Основанием для ложноотрицательного результата иногда становится иммуносупрессия или иммунокомпетенция, а также острый инфекционный процесс, протекающий в организме.

Кроме ложноотрицательного, с той же степенью вероятности, может быть и ложноположительный. На его получение могут влиять внешние или внутренние факторы – например, такое случается, если у человека аутоиммунные патологии, ревматоидный фактор. Причиной может стать даже пассивная передача антител от уже приболевшего пациента.

расшифровка анализа

Качественный результат бывает только двух видов – либо обнаружен (положительный), либо нет (отрицательный). Количественный показатель отсчитывается от условной границы – 800 тыс. МЕ/мл. Высокая вирусная нагрузка при гепатите С – все, что превышает 800000 МЕна мл, низкая – все, что ниже этого рубежа. Если требуется более подробное трактование, то 600-30000 – это низкая. От 30 тыс. до 800 тыс. – средняя, а все остальное – уже угрожающая.

Исследование на вирусную нагрузку позволяет достичь разных результатов, когда в них появляется необходимость. С его помощью можно определить степень опасности для окружающих, эффективность лечения, поставить достоверный прогноз о возможном выздоровлении. Все зависит от того, с какой целью он применялся, и какие данные были нужны гепатологу. Для выявления отсутствия заболевания есть даже специальная рекомендация Всемирной Организации здравоохранения.

После проведения многочисленных исследований, эксперты ВОЗ по гепатиту пришли к выводу, что для окончательного диагноза нужно провести троекратное исследование методом полимеразной цепной реакции. Это исследование получило название Тест 321, и ему можно верить, даже если остальные специфические маркеры вируса гепатита С отсутствуют. Но и без этой реакции клиницисты считают необходимым использовать разные методы.

Похожие материалы